　　尼古丁檢測(cè)試劑采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法和膠體金免疫層析法原理定性檢測(cè)尿液中的尼古丁，以金標(biāo)尼古丁單克隆抗體作為指示標(biāo)記物，在硝酸纖維素膜上的檢測(cè)線處和控制線處分別包被尼古丁-BSA結(jié)合物和羊抗鼠IgG多克隆抗體。檢測(cè)時(shí)，尿樣在毛細(xì)效應(yīng)下層析。如尿樣中的尼古丁濃度低于200ng/mL時(shí)，金標(biāo)抗體不能全部與尼古丁結(jié)合，未結(jié)合的金標(biāo)抗體在層析過程中與固定在檢測(cè)線處的尼古丁-BSA結(jié)合物結(jié)合，從而在檢測(cè)區(qū)（T）出現(xiàn)一條紫紅色條帶；如尿樣中尼古丁濃度高于200ng/mL時(shí)，金標(biāo)抗體全部與尼古丁結(jié)合，從而在檢測(cè)區(qū)（T）因?yàn)楦?jìng)爭(zhēng)反應(yīng)不會(huì)與尼古丁-BSA結(jié)合物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。無論尿樣中是否存在尼古丁，控制區(qū)（C）都會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶?？刂茀^(qū)（C）所呈現(xiàn)的紫紅色條帶是判斷是否有足夠的尿樣，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。尼古丁檢測(cè)試劑的17個(gè)相關(guān)操作技巧如下：

　　1.切記在加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

　　2.合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。

　　3.在吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

　　4.務(wù)必做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

　　5.樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

　　6.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。

　　7.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。

　　8.ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，加樣后及時(shí)放人孵箱，標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗干凈。

　　9.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

　　10.人ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

　　11.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。

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